肝片吸虫探针法荧光PCR检测试剂盒

客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
1,2-YAP Antibody异基氯化镁- LICL COMPLEX, 1M IN METHF

蝙蝠葛苷Ubc12 Antibody1,二甲基-2-咪唑啉酮

TBB(4,5,6,7-四溴-1H-并三唑)Hic-5 AntibodyAE-活性酯

羟基黄酮CD54/ICAM-1 AntibodyL-八氢吲哚-2-羧酸

银杏酸C17:1STIM1 Antibody2,6-二甲基

银杏酸C15:1STIM2 Antibody1,4,5,8-萘四甲酸酐

银杏酸C13:0，白果酸C13:0Ubc9 Antibody六正丁基二锡

AZD9291Ubc13 Antibody酰氯

AZD9291 MesylaIRF-7 Antibody81-81-2

酸链球菌素;链菌肽;尼生素Phospho-IκBβ (Thr19/Ser23) Antibody (Human Specific)2-(2-氯乙氧基)磺酰

盐霉素,沙利霉素RelB (C1E4) Rabbit mAb戊-1-

仙茅苷RelB (C1E4) Rabbit mAb5-己基-1-

丹皮酚原苷；牡丹酚原甙Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb盐酸托莫西汀

氧化槐定(标准品)Non-phospho-4E-BP1 (Thr46) (87D12) Rabbit mAb2-溴环己酮

一叶秋 ，一叶萩Phospho-IkappaB-epsilon (Ser18/22) Antibody2-氯环己酮

远志口山酮；远志山酮IIICD19 (SJ25C1) Mouse mAb (FITC Conjuga)更昔洛韦

雷公藤定Bmi1 (D20B7) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-甲

三正丁基十四烷基氯化膦RIP Antibody对氟甲酰
肝片吸虫探针法荧光PCR检测试剂盒载脂蛋白C3抗体BCRP/ABCG2/BXP-21 /FITC  荧光素标记三酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2抗体IgG20 ul

载脂蛋白E4抗体Bdkrb2/B2R/FITC  荧光素标记缓激肽B2受体抗体IgG100 ul

自噬相关基因AMBRA1抗体BDNF/FITC  荧光素标记BDNF蛋白抗体IgG20 ul

酸化自噬相关蛋白4C抗体BECN1/FITC  荧光素标记一种抑癌基因抗体IgG100 ul

酸化自噬相关蛋白4C抗体EpCAM/CD326/FITC  荧光素标记上皮细胞特异性EpCAM/CD326蛋白抗体IgG100 ul

酸化细胞凋亡信号调节激酶1抗体Beta-casein( Beta-casein)/FITC  荧光素标记 β-酪蛋白(抗体)IgG100 ul

酸化失调症蛋白1抗体BFGF/FITC  荧光素标记性成纤维细胞生长因子抗体IgG500 ul

脊髓小脑失调症蛋白1抗体BGP/FITC  荧光素标记骨保护蛋白/骨钙素抗体IgG100 ul

酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体Bid/FITC  荧光素标记BH3结构域凋亡诱导蛋白抗体IgG100 ul
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。