生物素3´末端DNA标记试剂盒
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
货号：pierce-89818
规格：足够用于20个标记反应
Biotin 3' End DNA Labeling Kit
货号：pierce-89818
规格：足够用于20个标记反应
Thermo Scientific生物素 3´ 末端 DNA标记试剂盒使用末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）催化非模板导向的核苷酸结合到DNA3’-OH末端1,2。TdT更倾向于选择单链DNA作为底物，但它也可以标记3’粘性末端和平末端的双链DNA，尽管效率较低。生物素 3´ 末端 DNA标记试剂盒可将1-3个生物素标记的核糖核苷酸（生物素-11-UTP）结合到DNA链3’末端。这种标记方法可以将生物素定位到探针的3’末端从而减少了杂交或序列特异性蛋白结合的干扰。生物素标记的DNA探针可应用于多种非同位素检测应用，包括电泳迁移率实验（EMSA）、DNA和RNA印迹、菌落杂交或原位杂交。
产品特点：
• 非同位素标记可以消除放射物的危险性及放射性废物的处理问题
• DNA3’末端1-3个生物素标记的核糖核苷酸可以减少杂交或序列特异性蛋白结合造成的干扰
• 生物素标记的探针可至少稳定存放一年
• 快速有效的30分钟标记程序
使用测序胶分析标记效率。10个不同的寡核苷酸片段（长度为21-25nt）使用生物素 3´ 末端 DNA标记试剂盒进行标记。TdT反应产物通过T4多核苷酸激酶（PNK）和（γ-32P）ATP进行放射性标记。PNK反应产物在20%丙烯酰胺/8M尿素/TBE中进行电泳。起始寡核苷酸的位置（没有生物素）标记为“n”。通过TdT可介导每条DNA链参入一至两个生物素标记的核糖核苷酸（位置分别为“n+1”和“n+2”）。标记效率从72%（ENBA正义链）至94%（Oct-1正义链）。试剂盒对照寡核苷酸的标记效率为88%-94%。
使用3’末端生物素标记双链的EMSA结果。正义链和反义链通过生物素3’末标DNA记试剂盒进行标记后，在室温杂交4小时，形成了含有图示转录因子结合位点的双链。通过Thermo Scientific LightShift Chemiluminescent EMSA Kit进行凝胶迁移实验，每个结合反应需20飞摩尔的双链DNA。转录因子来自于使用Thermo Scientific NE-PER Nuclear and Cytoplasmic Extraction Reagents（Product # 78833）获得的Hela细胞的核提取物（每个反应需要2ul或6-7ug蛋白）。在NFκB体系中，核提取物来自于经过TNF-α处理或不处理的Hela细胞。竞争反应含有200倍的非标记双链，以此确定蛋白：DNA相互作用的特异性。
试剂盒组成：5xTdT反应缓冲液 1ml
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非标记的对照寡核苷酸 140ul
生物素标记的对照寡核苷酸 40ul
末端脱氧核苷酸转移酶（TdT） 50ul
生物素-11-UTP 100ul
非标记的对照寡核苷酸 140ul
生物素标记的对照寡核苷酸 40ul
生物素3´末端DNA标记试剂盒
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