荧光定量PCR试剂盒技术：
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒，包括盒体，盒体由上盒体和下盒体组成，上盒体的底面上设有限位凸起，下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽，且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖，侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾，下盒体的上端边缘处设有环形凸起，两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上；凹槽的内部设有固定杆，固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架；下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分，并将两个部分通过侧盖连接，即可保证试剂盒的便携性，同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA，设计并合成引物，完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析，提供实验报告给您。

样品RNA的抽提：
①取冻存已裂解的细胞，室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的，盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后，15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相，中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA，混匀后15到30℃孵育10分钟后，于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液，每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPCH2O配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时，先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次，使其*溶解，获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1）紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释（1:100）后，读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值，测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为：A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
    10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1（10pM）               2μl
      引物2（10PM）              2μ
      Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl） 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
   视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
京尼平RBPSUH Antibody2-四氢糠

桔梗皂苷D(标准品)Ikaros Antibody2-乙氧基-氟酸

菊苣酸（标准品）Phospho-SHIP2 (Tyr1135) (D33C6) XP® Rabbit mAb2,4,6-三羟基乙酮

具栖冬青苷(标准品)EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,2-二甲基-羟基酸

（标准品）Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-羟并咪唑

莰（标准品）Thymidyla Synthase (D26G11) Rabbit mAb2-氯并咪唑

科罗索酸（标准品）NBR1 (D2E6) Rabbit mAb (PE Conjuga)辛可尼丁

可可（标准品）PEN2 Antibody刺芒柄花素

苦参(标准品)Pim-1 (D8D7Y) Rabbit mAb9-芴酮

苦参Human _His6Fas Ligand/TNFSF6 (h_His6FasL)(三氟甲基)-5,6,7,8-四氢-[1,2,4]三唑并[4,a]吡盐酸盐

D-(-)-奎宁酸（标准品）Human _His6Fas Ligand/TNFSF6 (h_His6FasL)大豆素

辣椒,辣椒素（天然提取标准品）TNFRSF8/CD30 (E4L4I) XP® Rabbit mAb异喹啉羧酸

辣椒,辣椒素(天然提取)TNFRSF8/CD30 (E4L4I) XP® Rabbit mAb喹啉-羧酸

辣椒,辣椒素(合成)Mcl-1 (D35A5) Rabbit mAb巯基甲酸

莱苞迪甙C（标准品）Mcl-1 (D35A5) Rabbit mAb2,4,6-*

莱苞迪甙D（标准品）Phospho-HNF1α (Ser247) Antibody溴丁酸甲酯

老鹳草素（标准品）Fascin (55k-2) Mouse mAb2,5-二羟基乙酮

酪(标准品)NKX6.1 (D8O4R) Rabbit mAb羟基喹唑啉
尖孢镰刀菌探针法荧光PCR检测试剂盒腺苷脱氨酶抗体VE-cadherin/CD144/VECD/FITC  荧光素标记上皮型钙粘附分子/血管内皮钙粘蛋白抗体IgG100 ul

含锚蛋白重复序列-细胞因子信号抑制物盒蛋白家族4抗体CD146(MCAN)/FITC  荧光素标记抗黑色素瘤细胞粘付分子CD146抗体IgG100 ul

ATRNL1蛋白抗体CD158a/KIR2DL1/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体2DL1抗体IgG20 ul

AFP4a蛋白抗体CD158b2/KIR2DL3/NKAT2a/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体2DL3抗体IgG100 ul

铁蛋白Fe65样蛋白1抗体CD158D/KIR2DL4/G9P/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体2DL4抗体IgG100µl

铁蛋白Fe65样蛋白2抗体CD158e/KIR3DL1/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体3DL1抗体IgG100 ul

β淀粉样蛋白前体蛋白结合蛋白2抗体CD158e/KIR3DL1/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体3DL1抗体IgG100 ul

早老素稳定因子样蛋白/γ分泌酶组件蛋白APH1抗体CD158i/KIR2DS4/FITC  荧光素标记NK细胞抑制性受体2DS4抗体IgG20 ul

酸化蛋白激酶AKT1抗体CD147/EMMPRIN/FITC  荧光素标记细胞外基质金属蛋白酶诱导因子抗体IgG100 ul