客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
产品名称 | |
英文名称 | Schistosoma nasale |
货号 | YSP97184 |
荧光定量PCR试剂盒技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
样品RNA的抽提:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
脱氧核糖核酸酶Ⅹ(DNASEⅩ)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 酿酒酵母 5g
醇脱氢酶2(ADH2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 顶青霉 25g
醇脱氢酶3(ADH3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 扣囊复膜孢酵母 5g
醇脱氢酶4(ADH4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 黑紫红菇 1g
醇脱氢酶5(ADH5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 粘着剑菌 250mg
醇脱氢酶6(ADH6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 喇叭菌 5g
醇脱氢酶7(ADH7)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >98.0%(GC) 豆芽菌1-2 1g
分拣连接蛋白2(SNX2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) >98.0%(GC) 枯草芽孢杆菌 250mg
分拣连接蛋白3(SNX3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 球孢白僵菌 25g
分拣连接蛋白4(SNX4)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 97% 极单胞菌属 5g
分拣连接蛋白5(SNX5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 枯斑拟盘多毛孢 1g
分拣连接蛋白6(SNX6)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 香栓孔菌 250mg
分拣连接蛋白19(SNX19)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 耐盐考克氏菌 5g
分拣连接蛋白9(SNX9)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98.5% 地下盐单胞菌 25g
分拣连接蛋白8(SNX8)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98.5% 苏云金芽孢杆菌 5g
分拣连接蛋白15(SNX15)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 壳菌 100g
分拣连接蛋白1(SNX1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 98% 变粉红锁掷孢酵母 25g
连环蛋白α2(CTNNα2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) ≥95% 污黑腐皮壳 1g
鼻血吸虫探针法荧光PCR检测试剂盒早期B淋巴细胞因子1抗体XRCC1(X-ray Repair Cross Complementing 1) X射线修复交叉互补蛋白/细胞基切除修复基因抗原20 ul
内皮素受体A抗体ZO-1 peptide 胞质紧密粘连蛋白1抗原100 ul
表皮生长因子受体抗体Ag-ARC(ARG3.1/ARC, Activity-regulad cytoskeleton-associad proin) ARC(多肽抗原)20 ul
表皮生长因子受体抗体Angionsin II receptor(Ang II ) 血管紧张素Ⅱ受体(抗原)400 ul
早期生长应答蛋白1抗体Akt/PKC(Proin Kinase C,PKC) 蛋白激酶C(多肽抗原)100 ul
表皮膜蛋白1抗体Beta1-adrenergic receptor 肾上腺素能受体β1(抗原)20 ul
内皮细胞受体蛋白酪氨酸激酶A抗体(肿瘤坏死因子α诱导蛋白4)Annexin V 膜粘连蛋白-5(抗原)100 ul
酪氨酸蛋白激酶A4抗体AQP4(aquaporin Proin-4) 水通道蛋白-4(抗原)100 ul
E受体3抗体B7-H4 B7-H4(抗原)100 ul
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。