样品RNA的抽提:
①产品仅用于科研取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
产品名称 | |
英文名称 | Campylobacter jejuni |
货号 | YSP96496 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
荧光定量PCR试剂盒技术:
本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
利谷隆(标准品)CDC20 (D6C2Q) Rabbit mAb(三氟甲基)甲酸乙酯
灭蚁灵(标准品)Sec61A1 (D4K2Z) Rabbit mAb1-(氟基)哌盐酸盐
噻草(标准品)Sec61A1 (D7Q6V) Rabbit mAb2-羟基-溴甲酸
甲磺隆标准溶液(10μg/ml,u=4%)MLLT1/ENL (D9M4B) Rabbit mAb1-苄基-基-基哌啶盐酸盐
四聚乙(标准品)COBRA1 (D6K9A) Rabbit mAb7-甲基吲哚-甲
异甲草(标准品)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb(S)-2,5-二氢-3,6-二甲氧基-2-异基吡
甲霜灵(标准品)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAbN-羟基乙脒
标准溶液(100μg/ml,u=4%)MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-7-氮杂吲哚
标准溶液(1.00mg/ml,基体:甲)MIST1/bHLHa15 (D7N4B) XP® Rabbit mAb溴-甲氧基
甲氧滴滴涕(标准品)USP9X (D4Y7W) Rabbit mAb6-甲基喹喔啉
甲氧隆(标准品)SimpleChIP® Human 28S rDNA Repeat Primers(溴乙酰基)吡啶盐
灭草隆(标准品)SF2/ASF (D1N3S) Rabbit mAb5-硝基愈创木酚钠
灭多威(标准品)β-Canin (D10A8) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)氯-6,7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉
烟嘧磺隆(标准品)HA-Tag (C29F4) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-甲硫基并噻唑
戊硫(标准品)SimpleChIP® Human c-Myc Intron 1 Primers二氯
甲酸铵(色谱级)Lipin 1 (D2W9G) Rabbit mAb氯-4'-甲氧基酮
Amberli IR-120阳离子交换树脂(钠型)Thioredoxin 2 (D1C9L) Rabbit mAb4,5-二氨基-1-(2-羟乙基)吡唑硫酸盐
乙酸戊酯(标准品)SF2/ASF (D6S7V) Rabbit mAb赖诺普利
空肠弯曲杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒垂体腺苷酸环化酶激活肽(PACAP)ELISA试剂盒Phospho-IKK alpha/beta (Ser176/Ser180) 酸化KB抑制蛋白激酶α/β抗体100 ul
垂草扁桃酸(VMA)ELISA试剂盒phospho-IKB alpha (Ser32/36) 酸化IKB alpha(Ser32/36)抗体100 ul
穿孔素/成孔蛋白(PRF1/PFP)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr188) 酸化KB抑制蛋白激酶β抗体100 ul
程序性细胞死亡因子4(PDCD4)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr466) 酸化KB抑制蛋白激酶β抗体100 ul
程序性死亡因子配体1(PD-L1/CD274)ELISA试剂盒phospho-IKK beta (Tyr199) 酸化KB抑制蛋白激酶β抗体100 ul
程序性死亡-1(PD-1)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser85) 酸化KB抑制蛋白激酶γ抗体100 ul
成纤维细胞生长因子9(FGF9)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser31) 酸化KB抑制蛋白激酶γ抗体150 mg
成纤维细胞生长因子8(FGF8)ELISA试剂盒phospho-IKK gamma (Ser376) 酸化KB抑制蛋白激酶γ抗体1 mg
成纤维细胞生长因子6(FGF6)ELISA试剂盒IKI3 family proin 拟南芥IKI3抗体5 mg