实验通用规则：

1、洗液不够时，可用蒸馏水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸缓冲液，加入0.1%的吐温20作为洗液。加入1/1000的叠氮钠后可长期保存。

2、液体全部加完后，可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒，混匀液体。也可以用酶标仪的晃动功能。

3、底物有一定的毒性，终止液对皮肤有腐蚀性，应尽量避免接触。

4、检测前，要打开酶标仪，使之稳定10分钟以上。

5、吸取液体时，要用量程和需要量接近的枪去吸，减少误差。

6、将液体加到酶标孔中时，避免枪头和孔内液体接触，可使枪头上的液滴和孔壁接触，液滴会自然流下去。

7、温浴时，要用不干胶或胶带纸封好酶标板，防止水分的蒸发。

8、洗板时，每次洗液加入后，应静置1分钟，使清洗更加*。没有洗板机时，倒去液体后，要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。

9、用枪吸取液体时速度不能太快，以免产生气泡而使吸取量不准确。
10、底物是光敏感的，要在临用前现配。

仪器：

1、分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪（比色测定波长为550nm）

2、恒温水浴箱或气浴箱 （孵育温度为37℃）

3、台式离心机

4、漩涡混匀器

5、微量移液器

样本收集与前处理：

血清（浆）可直接测定。

红细胞：需按照试剂盒中说明书上红细胞的测定方法进行提取后测定。

动物组织样本：可用生理盐水按重量体积比制备成组织匀浆液，离心取上清测定。

培养细胞、细菌、植物组织：常用PBS作为匀浆介质破碎后离心取上清测定。

具体的样本前处理：参考我们随货发送的《实验方法学》以及试剂盒中详细说明书。

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测定步骤：

1.加样

1. 除包被外都需45度加样

2.加样体积要准确

3.管底加样，不能加在管壁上

4.加样时不能产生气泡

2.温

1.加标本后和加结合物后，应立即放入按规定的反应温 度的水浴箱。

2.各ELISA板不应叠在一起。

3.为避免蒸发，板上应加盖，或将板平放在底部垫有湿 纱布的金属湿盒中。

4.加入底物后，反应的时间和温度通常不做严格要求。 如室温高于20℃，ELISA板可避光放在实验台上，以便 不时观察，待对照管显色适当时，即可终止酶反应。

3.洗涤

1.洗涤在ELISA过程中不是反应步骤，但却 是决定实验成败的关键。

2.目的是洗去反应液中没有与固相抗原或 抗体结合的物质以及在反应过程中非特 异性吸附于固相载体的干扰物质。

4.读板

1.阴性对照颜色极浅，在定性测定中一般 可采用目视比色。

2.如用酶标仪测定结果，准确性决定于 ELISA板底的平整与透明度、酶标仪的质 量和软件的算法。

4-苄氧-3- 98%兔子Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白64B抗体Rabbit anti-mouse Kappa light chain/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的兔抗小鼠k链

5--2-氟 97%兔子Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)免疫试剂盒组蛋白H3-K9转移酶抗体Rabbit anti-mouse Kappa light chain  兔抗小鼠k链

4-羧 97%兔转化生长因子β3(TGFB3)免疫试剂盒趋化素样因子超家族成员6抗体Rabbit anti-mouse Kappa Chain whole serum  兔抗小鼠k-链抗血清

2--4-氟 98%兔转化生长因子β2(TGFβ2)免疫试剂盒cornichon样蛋白抗体Rabbit Anti-mouse IgM/RBITC  罗丹明标记的兔抗小鼠IgM

2-羧 97%兔中性粒明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)免疫试剂盒Ras激酶抑制因子连接增强蛋白1抗体Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy7  PE-Cy7标记的兔抗小鼠IgM

2--4-茴香 95%兔脂蛋白α(Lp-α)免疫试剂盒Ras激酶抑制因子连接增强蛋白2抗体Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy5.5  PE-Cy5.5标记的兔抗小鼠IgM

5--2-氟 97%兔载脂蛋白E(Apo-E)免疫试剂盒Ras激酶抑制因子连接增强蛋白3抗体Rabbit Anti-mouse IgM/PE-CY5  PE-CY5标记的兔抗小鼠IgM

4--3-氟 97%兔载脂蛋白B100(apo-B100)免疫试剂盒分裂周期2样蛋白激酶5抗体Rabbit Anti-mouse IgM/PE-Cy3  PE-Cy3标记的兔抗小鼠IgM

3-  98%兔载脂蛋白A1(apo-A1)免疫试剂盒CD20样蛋白抗体（造血干4跨膜蛋白3）Rabbit Anti-mouse IgM/PE  PE标记的兔抗小鼠IgM

2- 97%兔诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)免疫试剂盒周期蛋白依赖性激酶CABLES1抗体Rabbit Anti-mouse IgM/HRP  辣根过氧化物酶标记的兔抗小鼠IgM

3-  97%兔游离睾酮(F-TESTO)免疫试剂盒分裂周期相关蛋白3抗体Rabbit Anti-mouse IgM/Gold  胶体金标记的兔抗小鼠IgM

4-  97%兔抑瘤素M(OSM)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白148抗体Rabbit Anti-mouse IgM/FITC  FITC标记的兔抗小鼠IgM

3-羧-4-氟 97%兔乙酰化饥饿激素(aGHRL)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白153抗体Rabbit Anti-mouse IgM/Cy7  Cy7标记的兔抗小鼠IgM

3-羧-5- 97%兔乙酰胆碱酯酶(AChE)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白160抗体Rabbit Anti-mouse IgM/Cy5.5  Cy5.5标记的兔抗小鼠IgM

3--4- 97%兔乙酰胆碱受体抗体(AChRab)免疫试剂盒卷曲螺旋结构域蛋白22抗体Rabbit Anti-mouse IgM/Cy5  Cy5标记的兔抗小鼠IgM
胰蛋白酶小鼠GATA结合蛋白4一枝黄花（标准品）Human, Mouse, Rat

人组织多肽抗原伊贝母(新疆贝母)（标准品）Human, Mouse, Rat

人肺癌标志物乙酰丁香酚Human, Mouse

小鼠干扰素诱导蛋白10乙酰杠柳寡糖CHuman, Mouse

大鼠分泌型免疫球蛋白A乙酰哈巴苷(标准品)Human, Mouse, Rat

人胃癌标志物乙酰化白藜芦(标准品)Human, Mouse, Rat

小鼠上皮中性粒活化肽78乙酰黄芪皂苷IHuman, Mouse, Rat

大鼠血红素氧合酶2乙酰升麻-3-O-α-L-阿拉伯糖苷Human, Mouse, Rat

小鼠氧化低密度脂蛋白抗体乙酰紫草素Human, Mouse, Rat

FAM29蛋白抗体Iumbrokinase/FITC  荧光素标记抗蚯蚓纤溶酶抗体/抗蚓激酶抗体IgG

MaFF相关蛋白抗体Integrin Alpha6/CD49f/VLA-6/FITC  荧光素标记整合素α6抗体IgG