公司产品仅用于科研测定步骤:
1、 酶标仪预热30min以上,调节波长至450nm。
2、 试剂三的稀释:将试剂三用蒸馏水稀释50倍,用多少配多少。(试剂三和蒸馏水1:49稀释。
3、 工作液配制:在试剂一加入100μl试剂二,充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。(若一次性测定样本较少,可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml:0.1ml的比例混匀配制)
4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解(溶解后一周内用完)。
5、 样本测定(在96孔板中依次加入下列试剂)
产品名称:α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)试剂盒价格
规格:48样、96样、
货号:GOY-016626
检测方法:紫外分光光度法、微板法
产品分类:呼吸代谢途径系列
贮存温度:2~8℃。
本试剂盒保质期:6个月
【实验前溶液配制】
配液1、将2X浓缩复溶液用去离子水按照1:1稀释(1 份浓缩复
溶液+1份去离子水)用于样本的复溶。
配液2、将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19
稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按 所需用量
配制洗涤液。
配液3、将30X浓缩样品提取液用去离子水按照1:29稀释(1份
浓缩洗涤液+29份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。
【所用仪器、试剂】
仪 器:微孔板酶标仪450nm/630nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装
置、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g )
微量移液器:单道 20μl~200μl、100μl~1000μl、多道 250μl
试 剂:乙腈、中性氧化铝
选择抗凝的注意点:
①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致,同时所取的全血的量也要尽量一致;
②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒,充分抗凝,防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;
③、抗凝全血收集的血浆相对较多(1ml抗凝全血能分离出0.4~0.5ml血浆);
④、抗凝收集的血浆冷冻保存后,解冻时可能会出现絮状浑浊,如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。
操作步骤:
实验开始前,各试剂均应平衡至室温(试剂不能直接在37℃溶解);试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量,如样品浓度过高时,应对样品进行稀释,以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
1. 加样:分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl,余孔分别加标准品或待测样品100μl,注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。
2. 弃去液体,甩干,不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl(在使用前一小时内配制),酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。
3. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分钟,大约400μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
4. 每孔加检测溶液B工作液(同检测A工作液) 100μl,酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。
5. 温育60分钟后,弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,350μl/每孔,甩干(也可轻拍将孔内液体拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶标板加上覆膜37℃避光显色(30分钟内,此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色,后3-4孔梯度不明显,即可终止)。
7. 依序每孔加终止溶液50μl,终止反应,此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性,底物反应时间到后应尽快加入终止液。
8. 用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度(OD值)。在加终止液后立即进行检测。
藤黄短小杆菌动物组织活性内质网分离试剂盒小鼠巨噬炎性1β(MIP-1β/CCL4)试剂盒
苏云金芽胞杆菌枥木亚种动物细胞高纯内质网分离试剂盒大鼠巨噬炎症1β(MIP-1β/CCL4)试剂盒
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疣孢链霉菌通用型内质网形态染色试剂盒小鼠巨噬炎性2(MIP-2)试剂盒
聚生壳菌内质网形态高质染色试剂盒大鼠巨噬炎性2(MIP-2)试剂盒
传染性法氏囊病病动物组织肌质网粗提分离试剂盒人巨噬炎性3α(MIP-3α/CCL20)试剂盒
青霉属动物组织活性肌质网分离试剂盒小鼠巨噬炎性3α(MIP-3α)试剂盒
水稻节杆菌动物组织高质纯化肌质网分离试剂盒大鼠巨噬炎性3α(MIP-3α)试剂盒
暗黑链霉菌动物组织肌质网横小管(T Tube)分离试剂盒人巨噬炎性3β(MIP-3β/ELC)试剂盒
挪威假丝酵母动物组织肌质网三联体(TRIAD)分离试剂盒小鼠巨噬炎性3β(MIP-3β)试剂盒
近平滑假丝酵母动物细胞核分离试剂盒大鼠巨噬炎性3β(MIP-3β)试剂盒
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砖红镰刀菌细胞/组织高质纯化溶体分离试剂盒兔基质金属1(MMP-1)试剂盒
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