产品名称：总生物碱含量测定试剂盒说明书

规格：48样、96样、

货号：GOY-016365

检测方法：可见分光光度法、微板法

产品分类：氧化应激系列

公司产品仅用于科研贮存温度：2～8℃。

本试剂盒保质期：6个月

【实验前溶液配制】

配液1、将2X浓缩复溶液用去离子水按照1:1稀释(1 份浓缩复

溶液+1份去离子水)用于样本的复溶。

配液2、将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1:19

稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水),或按 所需用量

配制洗涤液。

配液3、将30X浓缩样品提取液用去离子水按照1:29稀释(1份

浓缩洗涤液+29份去离子水),或按所需用量配制洗涤液。

【所用仪器、试剂】

仪        器:微孔板酶标仪450nm/630nm、旋转蒸发仪/氮气吹干装

置、均质器、振荡器、离心机、刻度移液管、天平(感量0.01g )

微量移液器:单道 20μl~200μl、100μl~1000μl、多道 250μl

试            剂:乙腈、中性氧化铝

测定步骤：

1、 酶标仪预热30min以上，调节波长至450nm。

2、 试剂三的稀释：将试剂三用蒸馏水稀释50倍，用多少配多少。（试剂三和蒸馏水1：49稀释。

3、 工作液配制：在试剂一加入100μl试剂二，充分混匀。配好的试剂4℃避光可保存一周。（若一次性测定样本较少，可按照实际用量将试剂一和试剂二按照20ml：0.1ml的比例混匀配制）

4、 将一瓶试剂四用5ml蒸馏水溶解（溶解后一周内用完）。

5、 样本测定（在96孔板中依次加入下列试剂）

选择抗凝的注意点：

①、每一份样本所加的抗凝剂的量要一致，同时所取的全血的量也要尽量一致;

②、收集抗凝全血后一定要轻轻颠倒，充分抗凝，防止部分血液未接触到抗凝剂而导致凝固;

③、抗凝全血收集的血浆相对较多（1ml抗凝全血能分离出0.4～0.5ml血浆）;

④、抗凝收集的血浆冷冻保存后，解冻时可能会出现絮状浑浊，如有则需要离心去掉浑浊后用于测定。

phospho-JAK2(Tyr221)  化酪氨激JAK-2抗体红生成受体(EPOR)ELISA试剂盒

Jak3  酪氨激JAK-3抗体红生成(EPO)ELISA试剂盒

Phospho-Jak3 (Tyr785)  化酪氨激JAK-3抗体红膜(EMP)ELISA试剂盒

Phospho-Jak3 (Tyr980/981)  化酪氨激JAK-3抗体红激因子(ESF)ELISA试剂盒

JNK1/3  氨基末端激1/3抗体横纹肌辅肌动α(sm Actinin-α)ELISA试剂盒

JNK2  氨基末端激2抗体亨廷顿相关1(HAP1)ELISA试剂盒

JNK3/MAPK10  氨基末端激3抗体黑瘤衍生亮氨拉链额外核因子(MLZE)ELISA试剂盒

Jab1  Jun激活区域-连接1抗体黑色抗体(MC Ab)ELISA试剂盒

phospho-JNK1/2/3(Thr183/185)  化氨基末端激1/2/3抗体黑色激(MSH)ELISA试剂盒

JNK1/2/3  氨基末端激1/2/3抗体黑色浓缩激(MCH)ELISA试剂盒

JAM1/CD321  连接粘附分子1黑色瘤转移表面黏附分子(MMSAM)ELISA试剂盒

p300/KAT3B  转录接头EP300抗体黑色瘤相关抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA试剂盒

KCNA5  电压阀门通道混合器相关亚家族成员5抗体黑色瘤活性抑制(MIA)ELISA试剂盒

KCNG4/KV6.3  离子通道G4抗体黑色瘤标记物(MART/Melan-A)ELISA试剂盒

KCNA7  电压阀门通道混合器相关亚家族成员7抗体核转录因子κBp65(NFκBp65)ELISA试剂盒细胞CASPASE-7表达比色法定量检测试剂盒10/50 次人主动脉内皮微小RNA大鼠巨噬炎性3α（MIP-3α/20）ELISA试剂盒,

细胞CASPASE-7表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人主动脉平滑肌微小RNA兔子可溶性CD40配体（sCD40L）ELISA试剂盒,

CASPASE-7表达西方杂交分析试剂盒5次人心肌微小RNA抑制β-B（Inhbb）ELISA试剂盒--动物，人

CASPASE-7免疫共沉淀分析试剂盒5次人心肌-成人微小RNA哥伦比亚CNA琼脂础

CASPASE-7表达elisa试剂盒25次人心肝成纤维微小RNADL-2-氨丁

细胞CASPASE-8表达流式细胞仪检测试剂盒10/20次人心脏成纤维-成人心室微小RNACBZ-L-天冬

冰冻切片组织TRAIL 表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人心肌成纤维-成人心房微小RNANHS活化琼脂糖凝胶4FF

石蜡切片组织TRAIL 表达荧光显微镜检测试剂盒10/20次人角膜上皮微小RNA人c-jun ELISA试剂盒,

载玻片细胞TRAIL 表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人角膜微小RNA人质金属抑制因子2（TIMP-2）ELISA试剂盒,TIMP-2 ELISA kit

冰冻切片组织TRAIL 表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人视网膜色上皮微小RNA人透明质结合（HABP）ELISA试剂盒,HABP ELISA kit

石蜡切片组织TRAIL 表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒10/20次人晶状体上皮微小RNA人登革热抗体（DF-Ab）ELISA试剂盒,DF-Ab ELISA

细胞TRAIL 表达比色法定量检测试剂盒10/50 次人虹膜色上皮微小RNA人钙调（CAM）ELISA试剂盒, CAM ELISA

细胞TRAIL 表达荧光定量检测试剂盒10/50 次人结膜成纤维微小RNA人前列F（PGF）ELISA试剂盒,PGF ELISA

TRAIL 表达西方杂交分析试剂盒5次人无色睫状上皮微小RNA人前列特异性抗原（PSA）ELISA试剂盒,PSA ELISA

TRAIL 免疫共沉淀分析试剂盒5次人小梁网微小RNA人环加氧2（COX-2）ELISA试剂盒,
总生物碱含量测定试剂盒说明书检测试剂盒ADP核糖基化因子结合2抗体

可溶程序性死亡分子-1检测试剂盒精氨加压受体2抗体

可溶性鸟环化检测试剂盒凋亡相关斑点样ASC抗体

可溶性CD163分子检测试剂盒丝状肌动结合抗体

可溶性CD36检测试剂盒抗凝血3抗体

可溶性CD38检测试剂盒人血清白单克隆抗体

可溶性CD40配体检测试剂盒载脂A4抗体

可溶性CD44V6检测试剂盒化Rho鸟交换因子2抗体

操作步骤:

实验开始前，各试剂均应平衡至室温（试剂不能直接在37℃溶解）；试剂或样品稀释时，均需混匀，混匀时尽量避免起泡。实验前应预测样品含量，如样品浓度过高时，应对样品进行稀释，以使稀释后的样品符合试剂盒的检测范围，计算时再乘以相应的稀释倍数。

1.        加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。空白孔加样品稀释液100μl，余孔分别加标准品或待测样品100μl，注意不要有气泡，加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀，酶标板加上盖或覆膜，37℃反应120分钟。为保证实验结果有效性，每次实验请使用新的标准品溶液。

2.        弃去液体，甩干，不用洗涤。每孔加检测溶液A工作液 100μl（在使用前一小时内配制），酶标板加上覆膜, 37℃反应60分钟。

3.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分钟，大约400μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

4.        每孔加检测溶液B工作液（同检测A工作液） 100μl，酶标板加上覆膜37℃反应60分钟。

5.        温育60分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分钟，350μl/每孔，甩干（也可轻拍将孔内液体拍干）。

6.        依序每孔加底物溶液90μl，酶标板加上覆膜37℃避光显色（30分钟内，此时肉眼可见标准品的前3-4孔有明显的梯度兰色，后3-4孔梯度不明显，即可终止）。

7.       依序每孔加终止溶液50μl，终止反应，此时蓝色立转黄色。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加入顺序相同。为了保证实验结果的准确性，底物反应时间到后应尽快加入终止液。

8.       用酶联仪在450nm波长依序测量各孔的光密度（OD值）。在加终止液后立即进行检测。