荧光定量PCR试剂盒技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
产品名称 | |
英文名称 | Goatpox Virus(GTPV) |
货号 | YSP96761 |
样品RNA的抽提:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
培利替尼;贝利替尼;EKB569乙酰氨基二酸二乙酯
雷公藤乙素(标准品)环氧氯烷
番泻苷C(标准品)基缩水甘油
番泻苷D(标准品)1,2-二溴
二氢辣椒(标准品)正基溴
五味子酯乙(标准品)溴
柴胡皂苷B1(标准品)溴炔
苷松新酮(标准品)1-溴-2-氯乙烷
白花前胡乙素(标准品)酰氯
白术内酯Ⅱ;苍术内酯II(标准品)1,2-二氯
蟾毒灵;蟾酥灵(标准品)2-
断血流皂苷A(标准品)3,二甲基-1-丁酸
三白草酮(标准品)1-代烷
大黄素-8-β-D-吡喃葡萄糖苷(标准品)双(*基硅基)氨基钠
异莲心(标准品)正
莲心高氯酸盐(标准品)
基酞(标准品)氯乙
茯苓酸(标准品)二酸单乙酯
山羊痘病毒探针法荧光PCR检测试剂盒酸化A-Raf抗体Phospho-CRMP-2 (Thr514) /FITC 荧光素标记兔抗、大、二氢嘧啶酶样2抗体IgG100 ul
酰基鞘氨脱酰酶2抗体CRP/Biotin 生物素化C-反应蛋白抗体IgG100 ul
脂肪细胞特异性粘附分子抗体CRP/FITC 荧光素标记C-反应蛋白抗体IgG20 ul
腺相关病毒5抗体CRP/HRP 辣根过氧化物酶标记鼠抗C-反应蛋白单克隆抗体IgG100 ul
腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗体CRTAM/FITC 荧光素标记CRTAM抗体IgG20 ul
腺苷单酸活化蛋白激酶β2抗体C-SKI/FITC 荧光素标记抗C-SKI抗体IgG1Kit
酸化细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体CSIG/FITC 荧光素标记细胞衰老抑制基因抗体IgG100 ul
细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体CSP/FITC 荧光素标记环子孢子蛋白(约氏疟原虫)抗体IgG20 ul
酸化蛋白激酶B2抗体CT/FITC 荧光素标记降钙素抗体IgG100 ul