组织细胞固定
1、为什么在免疫组化中标本要进行固定?
(1)防止标本从玻片上脱落;
(2)除去防碍抗原-抗体结合的类脂,使抗原抗体结合物易于获得良好的染色结果;
(3)固定的标本易于保存。
2、标本固定的基本原则是什么?
(1)不能损伤细胞内的抗原;
(2)不能凝集蛋白质;
(3)不能损伤细胞形态;
(4)固定后应保持细胞膜的通透性,以允许抗体进入与抗原结合。
3、常用抗原物质的固定方法的*选择是什么?
(1)丙酮的作用是溶解膜磷脂,所有的脂质双层(胞膜、核膜、细胞器膜等)已被破坏,但蛋白和多糖类不受影响。而丙酮固定后不需进行抗原修复,它是一种非交联固定剂。
(2)多聚甲醛固定对酶类和脂类保护的好,易与蛋白发生交联,所以一般经过甲醛或PFA固定后的标本一般需要抗原修复。
(3)蛋白质抗原:95%~*乙醇;
(4)酶、激素:丙酮;
(5)免疫球蛋白:*;
(6)病毒:丙酮、*、无水乙醇;
(7)多糖、细菌等:微火加热,甲醇、10%甲醛、丙酮;
(8)类脂(异嗜性抗原):10%甲醛,10%佛茂尔(ForMol)。
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