SMMC7721-LUC荧光标记细胞株说明书

SMMC7721-LUC荧光标记细胞株说明书实验报告
一、分离与培养：
    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；
    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
二、免疫荧光鉴定：
    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；
    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；
    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗（Abbioscience公司），然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗（嘉美生物公司）， 37℃条件下放置1h；
    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜(Leica公司)下观察图像并拍照。

胞培养操作规程： 
主要功能：
（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。
（3）与血管疾病的进展和稳定有关。
变化：
（1）主动脉硬化。
（2）主动脉瘤
（3）主动脉钙化。
基本特性：
（1）组织来源于正常大鼠大动脉组织。
（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。
（3）原代细胞培养末期液氮冻存。
（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。
（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。
（6）不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。

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核酸氧化8-氧脱氧鸟苷(8-oxo-dG)高效液相色谱(HPLC)分析试剂盒20 4,4-二羟基二苯砜(>98%,BR)  4,4-Dihydroxydiphenyl sulfone  质量规格：>98%,BR

核桃诱导(DKWJuglans)培养基500毫升溶液/片剂 4,5-二氯荧光素(>98%,BR)  4,5-Dichlorofluorescein  质量规格：>98%,BR

核桃诱导(DKWJuglans)*培养基500毫升溶液/片剂 对乙氧基(>98%,BR)  4-Ethoxybenzaldehyde  质量规格：>98%,BR

赫特法病毒DNA化试剂盒10/20 4-羟>98%,BR)  4-Hydroxycoumarin  质量规格：>98%,BR

黑色96孔板1块 4-甲氧基酚(>98%,BR)  4-Methoxyphenol  质量规格：>98%,BR

恒河猴主要组织相容性复合体(MHC/RhLA)ELISA检测试剂盒Rhesusmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/RhLA 96T/48T 对甲基肉桂酸(>98%,BR)  4-Methylcinnamic acid  质量规格：>98%,BR

烘培食物尿素比色法定量检测试剂盒20 4-甲基伞形酯-N-乙酰-b-D-氨基半乳糖苷(>98%,BR)  4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide  质量规格：>98%,BR

烘赔食品乙酸比色法定量检测试剂盒20 对硝基苄醇(>98%,BR)  4-Nitrobenzyl alcohol  质量规格：>98%,BR

烘赔食品乙酸激酶法定量检测试剂盒20 无毒型核酸染色剂  4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green  质量规格：BR

烘赔食物L-天门冬酰胺化学比色法定量检测试剂盒20 5,5-二甲基-1,3-环己二酮  5,5-Dimethyl-1,3-cyclohexanedione  质量规格：BR
小鼠促甲状腺素(TSH)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 5-羟基罗格列酮β-D-葡萄糖苷酸  5-Hydroxy Rosiglitazone β-D-Glucuronide  质量规格：美国进口

Rat osteoclast differeiation factor (ODF) ELISA Kit 大鼠破骨细胞分化因子(ODF)ELISA试剂盒 磺胺嘧啶  Sulfadiazine  质量规格：美国进口

Humanai-phospholipidaibody,Apl/APAELISAKit 人抗0脂抗体(Apl/APA)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装 N-乙酰基磺胺嘧啶  N-Acetyl Sulfadiazine  质量规格：美国进口

Humanbetacellulin,BTCELISA试剂盒人β细胞素(BTC)ELISA试剂盒规格：96T/48T 磺胺嘧啶-d4  Sulfadiazine-d4  质量规格：美国进口

植物种子甲磺酸乙脂突变诱导试剂盒3 辛伐他汀钠盐  Simvastatin, Sodium Salt  质量规格：美国进口

Humaargetedribonuclease,ELISAKit人靶向核糖核酸酶()ELISA试剂盒规格：96T/48T 6'-羟甲基辛伐他汀酸钠盐  6'-Hydroxymethyl Simvastatin Acid Sodium Salt  质量规格：美国进口

小鼠促甲状腺激素(TSH)ELISA试剂盒 ，英文名： TSH ELISA Kit 3'-羟基辛伐他汀  3’-Hydroxy Simvastatin  质量规格：美国进口

大鼠生长激素释放肽ghrelin(GHRP-Ghrelin)ELISA检测试剂盒Ratgrowthhormonereleasingpeptide-Ghrelin,GHRP-GhrelinELISAKit 96T/48T 辛伐他汀酰基-β-D葡萄糖苷酸  Simvastatin Acyl-β-D-glucuronide  质量规格：美国进口

人β羟(β-OHB)免疫试剂盒 Human Beta-Hydroxybyric Acid,β-OHB ELISA Kit 辛伐他汀二聚体杂质  Simvastatin Dimer Impurity  质量规格：美国进口

英文名称MouseAngiogeninELISAKit小鼠血管生长素(Angiogenin)规格：96T/48T 辛伐他汀，1-芘乙酰酯  Simvastatin, 1-Pyreneacetyl Ester  质量规格：美国进口
4,5-二氯荧光素(>98%,BR)  4,5-Dichlorofluorescein  质量规格：>98%,BR 核桃诱导(DKWJuglans)培养基500毫升溶液/片剂

对乙氧基(>98%,BR)  4-Ethoxybenzaldehyde  质量规格：>98%,BR 核桃诱导(DKWJuglans)*培养基500毫升溶液/片剂

4-羟基(>98%,BR)  4-Hydroxycoumarin  质量规格：>98%,BR 赫特法病毒DNA化试剂盒10/20

4-甲氧基酚(>98%,BR)  4-Methoxyphenol  质量规格：>98%,BR 黑色96孔板1块

对甲基肉桂酸(>98%,BR)  4-Methylcinnamic acid  质量规格：>98%,BR 恒河猴主要组织相容性复合体(MHC/RhLA)ELISA检测试剂盒Rhesusmajorhistocompatibilitycomplex,MHC/RhLAELISAKit 96T/48T

4-甲基伞形酯-N-乙酰-b-D-氨基半乳糖苷(>98%,BR)  4-Methylumbelliferyl N-acetyl-β-D-galactosaminide  质量规格：>98%,BR 烘培食物尿素比色法定量检测试剂盒20

对硝基苄醇(>98%,BR)  4-Nitrobenzyl alcohol  质量规格：>98%,BR 烘赔食品乙酸比色法定量检测试剂盒20

无毒型核酸染色剂  4S Green Nucleic Acid Stain 4S Green  质量规格：BR 烘赔食品乙酸激酶法定量检测试剂盒20

5,5-二甲基-1,3-环己二酮  5,5-Dimethyl-1,3-cyclohexanedione  质量规格：BR 烘赔食物L-天门冬酰胺化学比色法定量检测试剂盒20

5-氟胞苷(>98%,BR)  5-Fluorocytidine  质量规格：>98%,BR 烘赔食物L-天门冬酰胺酶偶联反应比色法定量检测试剂盒20