荧光定量PCR试剂盒技术:
产品仅用于科研本实用新型技术公开了一种实时荧光定量PCR试剂盒,包括盒体,盒体由上盒体和下盒体组成,上盒体的底面上设有限位凸起,下盒体的顶面上设有与限位凸起匹配的凹槽,且在下盒体左右侧壁的下端均软连接有侧盖,侧盖远离下盒体的一端连接有卡勾,下盒体的上端边缘处设有环形凸起,两个卡勾分别勾住环形凸起的左右两端将上盒体固定在下盒体上;凹槽的内部设有固定杆,固定杆上通过转动件转动连接有用于放置试管的试管架;下盒体的左右两侧均设置有收纳槽。本实用新型技术通过将盒体分为上下组合的两个部分,并将两个部分通过侧盖连接,即可保证试剂盒的便携性,同时使用试剂盒自带的试管可提高检测的效率。
客户只需提供样品和待检测基因名称即可。由我们提取RNA,设计并合成引物,完成荧光定量PCR实验以及后续数据分析,提供实验报告给您。
产品名称 | |
英文名称 | Fonsecaea pedrosoi |
货号 | YSP96723 |
样品RNA的抽提:
①取冻存已裂解的细胞,室温放置5分钟使其*溶解。
②两相分离 每1ml的TRIZOL试剂裂解的样品中加入0.2ml的,盖紧管盖。手动剧烈振荡管体15秒后,15到30℃孵育2到3分钟。4℃下12000rpm离心15分钟。离心后混合液体将分为下层的红色酚相,中间层以及无色水相上层。RNA全部被分配于水相中。水相上层的体积大约是匀浆时加入的TRIZOL试剂的60%。③RNA沉淀 将水相上层转移到一干净无RNA酶的离心管中。加等体积异丙醇混合以沉淀其中的RNA,混匀后15到30℃孵育10分钟后,于4℃下12000rpm 离心10分钟。此时离心前不可见的RNA沉淀将在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀。混匀后,4℃下7000rpm离心5分钟。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA时,先加入无RNA酶的水40μl用枪反复吹打几次,使其*溶解,获得的RNA溶液保存于-80℃待用。
2 RNA质量检测
1)紫外吸收法测定
先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
① 浓度测定
A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。好设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
DMT保护性脱氧肌苷Phospho-Bad (Ser112) (7E11) Mouse mAb (Biotinylad)
N-乙酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基*基)-2'-脱氧胞苷Lipin 1 Antibody5-羟基-2-戊酮
保护胸甙(DMT-T)Lipin 1 Antibody
DMT保护性脱氧尿苷NDRG1 Antibody氯乙
D-木糖(标准品)EpCAM (VU1D9) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)1,3,2-二噁唑噻吩-2,2-二氧化物
D-木糖NCAM1 (CD56) (MY31) Mouse mAb (APC Conjuga)乙
2',3'-二脱氧尿苷(ddU)Phospho-eIF2α (Ser51) (D9G8) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-乙酰基吡咯
潮霉素BMalic Enzyme 3 Antibody1H-咪唑-甲酸
5'-O-(4,4'-二甲氧基三基)-N2-异丁酰基-2'-脱氧鸟苷(DMT-ibu- dG)AKAP1 (D9C5) XP® Rabbit mAb1,3,5-*基吡唑
N甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基三基)-2'-脱氧胞甘(DMT- Bz- dC)AKAP1 (D9C5) XP® Rabbit mAb2-氨基-5-溴吡啶
N6-甲酰基-5'-O-(4,4'-二甲氧基*基)-2'-脱氧腺苷(DMT-dA-Bz)Mouse Inrleukin-1β (mIL-1β)(甲硫基)酚
rU亚酰单体Mouse Inrleukin-1β (mIL-1β)2-溴乙
Bz-rA亚酰单体TAK1 (D94D7) Rabbit mAb3,二氟环丁烷羧酸
i-bu-rG亚酰单体Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)甲基-硝基吡啶-N-氧化物
PF299804(EGFR抑制剂)Mouse Inrleukin-4 (mIL-4)2,二甲基-5-硝基吡啶
Ac-rC亚酰单体Mouse Inrleukin-4 (mIL-4)(氨基)
氟尼辛葡Phospho-IκBα (Ser32) (14D4) Rabbit mAb (Biotinylad)2,二氨基甲酸甲酯
氟尼辛葡(标准品)SOCS3 (D6E1T) Rabbit mAbalpha-硫辛酸
佩氏着色霉探针法荧光PCR检测试剂盒内收蛋白抗体CCL4/MIP-1 Beta/FITC 荧光素标记巨噬细胞炎性蛋白1β抗体IgG100 ul
脂肪组织分化相关蛋白抗体CCL5/RANS/FITC 荧光素标记调节活化的正常T细胞表达和分泌的因子IgG100 ul
脂联素受体1抗体CCL6/C10/FITC 荧光素标记嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL6抗体IgG20 ul
肾上腺髓质素受体抗体CCL9/CCL10/MIP-1 Gamma/FITC 荧光素标记巨噬细胞炎症蛋白-1γ抗体IgG100 ul
脂联素抗体CCL11/FITC 荧光素标记嗜酸粒细胞趋化蛋白抗体IgG100 ul
肾上腺髓质素抗体CCL12/MCP-5/FITC 荧光素标记单核细胞趋化蛋白5抗体IgG100 ul
腺苷受体A3抗体CCL13/MCP-4/FITC 荧光素标记单核细胞趋化蛋白4抗体IgG300 ul
ADRA2肾上腺素能受体2抗体CCL14/HCC-1/FITC 荧光素标记嗜酸粒细胞趋化蛋白14抗体IgG100 ul
肾上腺素能受体β1抗体CYLD/cylindromatosis 1/FITC 荧光素标记兔抗、大、微管结合蛋白CYLD抗体IgG20 ul