玻璃珠法柱式真菌DNAout
产品及特点 真菌DNA提取是一个难题,一是因为真菌有菌丝体、孢子等多种*不同的结构形态,二是因为其细胞壁一般都很厚,比较难以破碎。本产品是液氮研磨法柱式真菌DNAout的姊妹产品,它利用玻璃珠法破碎细胞,主要用于从真菌孢子和液体培养的真菌细胞中提取DNA(液氮研磨法柱式真菌DNAout采用液氮研磨法破碎细胞,适用于从真菌菌丝体中提取其基因组DNA)。本产品具有下列特点:
1. 即开即用,提供包括玻璃珠、离心吸附柱在内的所有试剂和耗材。
2. 采用玻璃珠法破碎细胞,属于物理方法,远比基于蜗牛酶或破壁酶的温和化学破壁法重复性好,也不容易带入外援真菌DNA(注:文献报道蜗牛酶或破壁酶中常常有外源真菌DNA污染,用于提取真菌DNA往往会造成污染。这些文献可从本公司本产品介绍网页下方下载)。
3. 本方法提取一个样品只需要10余分钟,方便、快速和。
4. 一次可以处理5 mL的过夜真菌培养物,所得的基因组DNA OD260/OD280一般都在1.8左右,长度一般在20 kb左右,每mL菌液的DNA产率一般在1-3ug。可以直接用于PCR和酶切等后续试验。
规格及成分 成 分 50 次包装
酸洗玻 璃 珠,400 um 25 g
溶液A 25 mL
溶液B 25 mL
溶液C 75 mL
离心吸附柱 50套
通用洗柱液 50 mL
DNA洗脱液 10 mL
使用手册 1份
运输及保存 常温运输及保存,保存期为一年。
自备试剂 无
使用方法 1. 对菌液:取3-5 mL过夜培养的真菌菌液 (OD600一般在1以上)到干净的塑料离心管中,12000 rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
2. 对菌落:用接种针在在培养基上刮取尽可能多的真菌菌落,转移到装有1mL水的干净的塑料离心管中,洗涤下接种环上的菌体。12000 rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
3. 对孢子材料,一般取0.1g左右,直接加入到离心管中,然后进入下一步操作。
4. 在材料中加入无菌水1mL,振荡半分钟后12000rpm离心2分钟弃上清留沉淀。
5. 沉淀中加入500 uL溶液A和0.5克的玻璃珠,涡旋震荡10分钟。
6. 加入500uL的溶液B,涡旋震荡,12000rpm离心2分钟,将上清液全部转移到一个5mL的干净的塑料离心管中。或者每管0.3mL,分别转移到2-3个1.5mL的干净的塑料离心管中。
7. 在上清中加入3倍体积的溶液C,颠倒数次混匀后,分三次上离心吸附柱,每次上柱后均先室温放置2分钟,然后12000rpm离心1分钟,倒掉穿透液,再第二次上柱,重复上面的操作,直到挂柱步骤完成。
8. 在离心吸附柱中加入500 uL通用洗柱液,12000rpm离心1分钟,倒掉穿透液。
9. 重复上步操作一次。
10. 12000rpm空柱离心1分钟。
11. 加入50-100 uL DNA洗脱液,室温放置1分钟以上,12000rpm离心1分钟,穿透液即为真菌DNA样品。
12. 为了得到更多的DNA样品,可以重复上步操作1-2次。
13. 所得DNA即可立即使用或放冰箱长期保存。
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