HPLC 同时测定苍耳子中 6 个化学成分的含量

HPLC 同时测定苍耳子中 6 个化学成分的含量^*

朵睿^1，2 ，刘玉红¹ ，*奎³ ，易进海^1＊＊

( 1． 四川省中医药*，成都 610041; 2． 泸州医学院，泸州 646000; 3． *成都生物所，成都 610041)

摘要 目的: 用 HPLC 同时测定苍耳子中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1，5 － 二咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎

宁酸 6 个化学成分的含量。方法: 采用 Eclipse XDB － C₁₈ ( 250 mm ?4. 6 mm，5 μm) 色谱柱，以甲醇 － 0. 1% 磷酸为流动相进行

梯度洗脱，流速 1 mL?min ^－ 1 ，检测波长 254 nm，柱温 35 ℃ 。结果: 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1，5 － 二咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎宁酸色谱峰分离良好。进样量分别在 0. 012 ～ 1. 2、0. 028 ～ 2. 8、0. 012 ～ 1. 2、0. 014 ～ 1. 4、0. 024 ～

2. 4、0. 011 ～ 1. 1 μg 范围内线性关系良好。平均回收率( n = 6) 分别为 102. 3% 、96. 4% 、99. 1% 、103. 1% 、103. 0% 、103. 4% ， RSD 分别为 1. 8% 、1. 1% 、1. 8% 、1. 5% 、2. 0% 、1. 9% 。结论: 建立的苍耳子 HPLC 含量测定方法可用于苍耳子的质量控制。

关键词: 中药质量控制; 苍耳子; 新绿原酸; 绿原酸; 隐绿原酸; 噻嗪双酮苷; 1，5 － 二咖啡酰奎宁酸; 4，5 － 二咖啡酰奎宁酸;

液相色谱

中图分类号: R917 文献标识码: A 文献编号: 0254 － 1793( 2013) 01 － 0078 － 05

HPLC simultaneous determination of the content of 6 constituents in Fructus Xanthii^*

DUO Rui^1，2 ，LIU Yu － hong¹ ，WANG Ming － kui³ ，YI Jin － hai^1＊＊

( 1． Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences，Chengdu 610041，China; 2． Luzhou Medical College，

Luzhou 646000，China; 3． Chengdu Institute of Biology，Chinese Academy of Sciences，Chengdu 610041，China)

Abstract Objective: To establish a method for simultaneous determination of 6 constituents( neochlorogenic acid， chlorogenic acid，cryptochlorogenic acid，xanthiside，1，5 － dicaffeoylquinic acid，and 4，5 － dicaffeoylquinic acid) in Fructus Xanthii． Methods: The assay was conducted on a Eclipse XDB － C₁₈ column( 250 mm ×4. 6 mm，5 μm) with methanol － 0. 1% H₃ PO₄ as phase． The flow rate was 1. 0 mL·min ^－ 1 ，the detection wavelength was 254 nm and the column temperature was 35 ℃ ． Results: The correlation coefficient between concentration and chromatograph-ic peak area of neochlorogenic acid，chlorogenic acid，cryptochlorogenic acid，xanthiside，1，5 － dicaffeoylquinic acid，and 4，5 － dicaffeoylquinic acid was over 0. 9999 in the range of 0. 012 － 1. 2，0. 028 － 2. 8，0. 012 － 1. 2，0. 014

－ 1. 4，0. 024 － 2. 4，0. 011 － 1. 1 μg，respectively． The average recoveries( n = 6) of 6 constituents were 102. 3% ， 96. 4% ，99. 1% ，103. 1% ，103. 0% ，and 103. 4% ，respectively; RSDs were 1. 8% ，1. 1% ，1. 8% ，1. 5% ，2. 0% ，and 1. 9% ，respectively． Conclusion: The established method can be used for the quality control of Fructus Xanthii．

Key words: traditional Chinese medicine quality control; Fructus Xanthii; neochlorogenic acid; chlorogenic acid; cryptochlorogenic acid; xanthiside; 1，5 － dicaffeoylquinic acid; 4，5 － dicaffeoylquinic acid; HPLC

苍耳子 ( Fructus Xanthii ) 为菊科植物苍耳 ( Xanthium sibiricum Patr． et Widd． ) 的干燥成熟带种皮 的 果 实，具 有 散 风 除 湿、通 鼻 开 窍 的 功

［3］，

   苍耳子质量参差不齐 故对苍耳子进行质量控

制尤为重要。苍耳子所含化学成分复杂，其中酚酸类、噻嗪双酮及其苷类物质为苍耳子的有效成

   双酮苷的含量测定已分别有文献报道，但这种单

• 国家重点基础研究发展计划( 973 计划) 课题( 2009CB522804)

＊＊ 通讯作者 : ( 028) 85210843; E － mail: yijinhai@ yahoo． com． cn

一类别成分指标的质量控制模式，难以全面反映苍耳子的真实质量。本文利用 HPLC 法，在同一条件下同时测定不同产地苍耳子药材及饮片中 5 个酚酸( 新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、1，5 － 二咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎宁酸) 和噻嗪双酮苷的含量，优化了测定条件，该方法简便可行，为控制苍耳子的质量提供科学方法。

• 仪器与试药

Agilent 1200 型液相色谱仪( 包括四元泵， DAD 检测器，柱温箱，自动进样器，工作站 ) ;

HU10300 /40B 超声波清洗仪; 岛津 AUW220D 型十万分之一天平; Sigma 3K15 高速冷冻离心机; Milli-

pore Milli － Q Integral 3 超纯水机。

对照品: 新绿原酸( 批号 MUST － 10091501) 、隐

绿原酸( 批号 MUST － 10091811) 、1，5 － 二咖酰奎宁酸( 批号 MUST － 10061706) 、4，5 － 二咖酰奎宁酸 ( 批号 MUST － 11081803) 购自成都曼思特生物制品有限公司 ( 纯度均大于 98. 0% ) ; 绿原酸 ( 批号

0753 － 200111) 购自中国食品药品检定研究院 ( 纯度大于 98. 0% ) ; 噻嗪双酮苷( 自制，HPLC 峰面积归一化法测定纯度为 98. 4% ) ，化性质和光谱数据分析，鉴定其结构。水为纯净水; 其余试剂均为分析纯。苍耳子购于四川、辽宁、河北、山东、吉林、湖

北、云南等地，由四川省中医药*舒光明研究员鉴定为菊科植物苍耳 ( Xanthium sibiricum Patr． et Widd． ) 的干燥成熟果实。

• 方法与结果

2. 1 混合对照品溶液的制备 精密称取新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1，5 － 二咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎宁酸的对照品适量，加 50% 甲

醇溶液配制成每 1 mL 含新绿原酸 0. 0246 mg、绿原

• 0. 0560 mg、隐绿原酸 0. 0236 mg、噻嗪双酮苷

• 0270 mg、1，5 － 二咖啡酰奎宁酸 0. 0488 mg、4，5 －

二咖啡酰奎宁酸 0. 0222 mg 的混合对照品溶液Ⅰ。

精密吸取上述混合对照品溶液 1 mL，加 50% 甲醇溶液稀释至 10 mL，摇匀，即得混合对照品溶液Ⅱ。

2. 2 供试品溶液的制备 精密称取苍耳子粉末 ( 过 40 目筛) 约 1. 0 g，置具塞锥形瓶中，精密加 50% 甲醇 ( 含 5% 甲酸 ) 溶液 20 mL，超声 ( 功率

300 W，频率 40 kHz) 处理 40 min，放冷，用 50% 甲醇 ( 含 5% 甲酸) 补重，于 12000 r?min ^－ 1 离心 5 min，

取上清液为供试品溶液。

2. 3 色谱条件 采用 Eclipse XDB － C₁₈ ( 250 mm × 4. 6 mm，5 μm) 色谱柱，柱温 35 ℃ ，流动相为甲醇 －

0. 1% 磷酸，梯度洗脱( 0 min，10% 甲醇; 5 min，15% 甲

醇; 12 min，15% 甲醇; 15 min，20% 甲醇; 20 min，25%

甲醇; 25 min，25% 甲醇; 30 min，27% 甲醇; 32 min， 35% 甲醇; 60 min，40% 甲醇) ，流速 1. 0 mL?min ^－ 1 ，

检测波长 254 nm。在上述条件下色谱图见图 1。

照品溶液Ⅰ 5、10、15、20、50 μL 和混合对照品溶液

Ⅱ 5、10、15、20 μL，注入液相色谱仪中，按照上述色谱条件测定。分别以进样量 X( μg) 为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标，计算回归方程，结果见表 1。

2. 5 精密度试验 精密吸取 2 号样品的供试品溶液 10 μL，按上述色谱条件连续进样 5 次，记录峰面积。新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1，

• － 二咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎宁酸峰面积

• RSD( n = 5) 分别为 0. 8% 、0. 2% 、0. 3% 、0. 7% 、

0. 6% 、1. 1% ，表明仪器精密度良好。

注( note) : “—”未检出( not detected) ; * 饮片( processed products)

• 讨论

［3 － 4］

   3. 1 色谱条件的优化 在文献 基础上进一步优化色谱条件，缩短分析时间，待测成分达到基线分离，

［3 － 5］

   zui终确定了本文所述的流动相。文献 分别采用

254 nm、327 nm 作为噻嗪双酮苷与酚酸类物质的检测波长，本文采用 DAD 检测器考察，结果显示在 254 nm

处新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、噻嗪双酮苷、1，5 － 二

咖啡酰奎宁酸、4，5 － 二咖啡酰奎宁酸 6 个成分均有较大响应值，故选择 254 nm 作为检测波长。

   水、50% 甲醇、70% 甲醇、甲醇、50% 甲醇( 含 5% 甲

酸) 、70% 甲醇( 含 5% 甲酸) 作为提取溶剂，结果表明以 50% 甲醇( 含 5% 甲酸) 溶液提取效率为佳，峰形较好。此外，还考察了超声与加热回流 2 种提取方法，结果表明二者提取效果无明显差异。故本实验采用 50% 甲醇( 含 5% 甲酸) 超声提取。提取溶剂用量和超声处理时间依据文献［5］确定。

   3. 3 结论 本文测定结果显示，北方产苍耳子( 1 ～

18) 与南方产苍耳子( 19 ～ 34) 中各成分含量无明显差异，表明苍耳子化学成分含量与产地无相关性，同文

   ［3］ ，

   献报道 一致。根据测定结果还可以看出 绿原酸和

1，5 － 二咖啡酰奎宁酸为苍耳子的主要成分，其中 1，

5 － 二咖啡酰奎宁酸的含量差异较大，含量zui高者为

3. 057 mg·g ^－ 1 ，zui低者为0. 138 mg·g ^－ 1 ，二者相差约

22 倍。各批次苍耳子中 1，5 － 二咖啡酰奎宁酸含量平均值为1. 587 mg?g ^－ 1 ，RSD 达到 85. 0% 。此外，苍耳子炮制品中新绿原酸和隐绿原酸含量比生品高，与

［6］

   文献报道 一致。

参考文献

• ChP( 中国药典) . 2010． Vol Ⅰ( 一部) : 115

• HUANG Li － juan ( 黄丽娟 ) ，GAO Ying － ying ( 高莹莹 ) ，XU Duan － lian( 许锻炼) ，et al． The effective mite － killing portion of

Fructus Xanthii( 苍耳子体外抑杀眼部蠕形螨的有效部位研究) ．

Chin J Pharm Anal( 药物分析杂志) ，2010，30( 11) : 2048

• QIU Yu － ling( 邱玉玲) ，DAI Ying － hui( 代英辉) ，WANG Dong ( 王东) ，et al． Determination of content of xanthiside from fruit of

Xanthiunm sibiricum by HPLC( HPLC 法测定苍耳子中苍耳子噻嗪双酮苷的含量) ． J Shenyang Pharm Univ( 沈阳药科大学学报) ，

2010，4( 4) : 306

• HAN Ting( 韩婷) ，LI Hui － liang( 李慧梁) ，HU Yuan( 胡园) ，et al． Phenolic acids in Fructus Xanthii and detmerination of contents of

total phenolic acids in dieffrent species and different populations of Xanthium in China( 苍耳子中酚酸类化合物及不同品种和居群苍耳子中总酚酸含量的测定) ． China Integr Med ( 中西医结合学

报) ，2006，4( 2) : 194

• SU Zhi － jun( 苏芝军) ． Study on the quanlity control of traditional

Chinese medieine Fructus Xanthii( 中药苍耳子的质量评价研究) : ［Thesis( 学位论文) ］． Guangzhou( 广州) : Guangzhou University of Chinese Medieine( 广州中医药大学) ，2010

6 MING Qian － liang( 明乾良) ，GAO Xiang( 高翔) ，ZHANG Hong

( 张宏) ，et al． Determination of chlorogenic acid in three species of cocklebur fruits from different regions of China by HPLC method( 用

HPLC 法测定不同地区三种苍耳子中绿原酸的含量 ) ． Pharm Care Res( 药学服务与研究) ，2008，8( 4) : 258

• YUAN Ke － hua( 苑克花) ，GUO Ji － zhao( 郭吉兆) ，XIE Fu － wei ( 谢复炜) ，et al． Gradient pyrolysis of chlorogenic acid( 绿原酸的

梯度热裂解分析) ． Tobacco Chem( 烟草化学) ，2011，5: 34

( 本文于 2012 年 11 月 12 日修改回)