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胃蛋白酶的测试步骤

2011年09月02日 10:16:25人气:1488来源:上海研生生化试剂有限公司

胃蛋白酶(英文名称:Pepsin)是一种消化性蛋白酶,由胃部中的胃粘膜主细胞(gastricchiefcell)所分泌,功能是将食物中的蛋白质分解为小的肽片段。胃蛋白酶的前体被称为胃蛋白酶原。胃腺主细胞分泌的蛋白酶。初分泌时为无活性的胃蛋白酶原,在胃酸或已激活的胃蛋白酶的作用下转变为具活性的胃蛋白酶。在适宜环境下(pH约为2)可将蛋白质分解为和胨,很少产生小分子肽或氨基酸。
  
取试管6支,其中3支各精密加入对照品溶液1ml,另3支各精密加入供试品溶液1ml,置37℃±0.5℃水浴中,保温5分钟,精密加入预热至37℃±0.5℃的血红蛋白试液5ml,摇匀,并准确计时,在37℃±0.5℃水浴中反应10分钟。立即精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,摇匀,滤过,取续滤液备用。
  
另取试管2支,各精密加入血红蛋白试液5ml,置37℃±0.5℃水浴中保湿10分钟,胃蛋白酶再精密加入5%三氯醋酸溶液5ml,其中1支加供试品溶液1ml,另1支加上述盐酸溶液1ml,摇匀,滤过,取续滤液,分别作为供试品和对照品的空白对照,照分光光度法(附录ⅣA)在275nm的波长处测定吸收度,算出平均值AS和A,按下式计算。
  
A×Ws×n每1g含蛋白酶活力(单位)=As×W×10×181.19式中AS为对照品的平均吸收度;A为供试品的平均吸收度;Ws为对照品溶液每1ml中含酪氨酸的量,μg;W为供试品取样量,g;n为供试品稀释倍数。
  
在上述条件下,每分钟能催化水解血红蛋白生成1μmol酪氨酸的酶量,为一个蛋白酶活力单位。

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