几种类型的胶原酶的区别及相关应用

2011年10月20日 15:44:29人气：11808来源：上海玉博生物科技有限公司

中文名称：胶原酶I型、II型、IV型、V型

英文名称：Collagenase I、Collagenase II、Collagenase IV、Collagenase V

CAS号: 9001-12-1

规格：100mg 1g

产地：sigma invitrogen

外观: 棕色或棕褐色结晶状冻干粉；

保存：-20°C

胶原酶的化学名为胶原蛋白水解酶（Collagenase），它能在生理PH和温度条件下特异性地水解天然胶原蛋白的三维螺旋结构，而不损伤其它蛋白质和组织。胶原酶的化学本质是一种蛋白质，因此，这对温度、PH和导致蛋白质变性的各种因素均非常敏感，极易受到外界条件的影响而改变其本身的构象和性质。

胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为zui终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。

分型	品牌（产地）	货号	规格	详细信息
Collagenase I（胶原酶I型）	sigma	C-0130	100mg/1g	主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
Collagenase I（胶原酶I型）	invitrogen	17100-017	100mg/1g	主要用于上皮、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的分离。
Collagenase II（胶原酶II型）	sigma	C-6885	100mg/1g	适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离。
Collagenase II（胶原酶II型）	invitrogen	17101-015	100mg/1g	适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织细胞的分离。
Collagenase IV（胶原酶IV型）	sigma	C-5138	100mg/1g	胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
Collagenase IV（胶原酶IV型）	invitrogen	17104-019	100mg/1g	胶原酶Ⅳ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
Collagenase V（胶原酶V型）	sigma	C-9263	100mg/1g	胶原酶Ⅴ包含至少7中蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。

胶原酶的配置

胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。　　注意：　　因为Ⅰ型胶原酶分子颗粒比胰酶大，不容易过滤，因此可以用蔡式滤器过滤除菌。　　钙、镁离子和血清成分不会影响胶原酶的消化作用，因而可用BSS（如D-hanks或者PBS）或含血清的培养液配制。

胶原酶的使用

1.将漂洗、修剪干净的组织剪成1~2mm左右小块　　

2.将组织块放入离心管（三角烧瓶）中加入30~50倍体积的胶原酶溶液，旋紧盖子（密封烧瓶）。　　

3.将烧瓶放入37℃水浴或者37℃孵箱内，每隔3min振摇一次，如能放在37℃的恒温震荡水浴箱中则更好。消化时间与组织的类别很有关系，对于某些肿瘤组织或其他较致密结缔组织，消化时间4~48h，对于容易消化的组织可以采用37℃震荡消化15~45min，也可以根据具体情况而定。如组织块已分散而失去块的形状，一经摇动即成细胞团或单个细胞，可以认为已消化充分。上皮组织经胶原酶消化后，由于上皮细胞对此酶有耐受性，可能仍有一些细胞团未*分散，但成团的上皮细胞比分散的单个上皮细胞更易生长，因此，如无特殊需要可以不必再进一步处理。　　

4.收集消化液（有时含个别组织块及没有充分消化的组织碎屑则需用100目不锈钢网过滤），离心1000r/min，5min，去除上清，用Hanks液或者无血清培养液离心漂洗1~2次，去除上清，加培养液制成细胞悬液，接种培养瓶。

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